|
|
 |
|
|
|
|
|
|
| Detalji |
| Projekt: |
Temeljna molekularno-biološka istraživanja streptomiceta |
| Voditelj: |
Dušica Vujaklija |
| Ustanova: |
Institut "Ruđer Bošković", Zagreb |
| Sažetak: |
Istraživanja će se usredotočiti na proučavanje streptomiceta, bakterija složenog životnog ciklusa sličnog višestaničnim eukariotima, te tako predstavljaju atraktivan model za proučavanje razvojnih procesa. Kod ovih bakterija uočena je fosforilacija proteina na tirozinskim ostacima, proteinska modifikacija bitna kod prijenosa signala eukariotskih stanica. Pronašli smo da je protein koji veže jednolančanu DNA (single stranded DNA-binding protein, SSB) kod streptomiceta i drugih bakterija novi supstrat bakterijskih tirozin-kinaza. Kako bi istražili važnost ovog procesa u rastu i preživljavanju bakterija, istražit će se razina fosforilacije SSB u različitim uvjetima rasta i oštećenja DNK. Mjesto tirozinske fosforilacije odredit će se masenom spektrometrijom i mutagenezom in vitro. Metodom uzastopnog afinitetnog pročišćavanja identificirat će se proteini koji stvaraju komplekse s SSB. Na ovaj način mogla bi se otkriti i streptomicetna tirozin kinaza. Fosforilacija bakterijskih SSB odvija se na tirozinu, dok su eukariotski SSB proteini modulirani fosforilacijom serina i treonina. Razumijevanje ovog procesa moglo bi dovesti do otkrića novih meta lijekova za patogene bakterije.Većina klinički važnih antibiotika potječe od streptomiceta koji imaju značajan rezistentni potencijal koji se može prenositi u mikrobnu zajednicu. Pojavljivanje rezistencije kod patogenih bakterija je izuzetno važno u medicini. Naš je cilj odrediti profil rezistancije u nizu kliničkih izolata, istraživati relativnu učestalost specifičnih odrednica rezistencije PCRom i usporediti ih s genima za rezistenciju kod streptomiceta. Ovo proučavanje moglo bi osigurati sustav ranog upozoravanja na rezistenciju koja je već prisutna i/ili bi se tek mogla pojaviti kod kliničkih bakterija. Streptomiceti igraju važnu ulogu u biotransformaciji i razgradnji pa stoga predstavljaju vrijedan izvor hidrolitičkih enzima u biotehnologiji. Klonirali smo lipazni gen iz bakterije S. rimosus, a ovaj je enzim rijedak primjer prave GDSL lipaze među bakterijskim lipazama. Naš cilj je proučiti biološka i katalitička svojstva ovog enzima te eventualno proizvesti varijacije proteina željenih svojstava za biotehnološku primjenu. Primijenit će se dva pristupa: racionalni dizajn mutacija i usmjerena evolucija. Tijekom istraživanja razvijat ćemo i učinkovit konjugacijski sustav domaćina (E. coli- Streptomyces) koji bi bili od općeg interesa za primjenu metode usmjerene evolucije. |
|
|
|
|
|
|
|
