|
|
 |
|
|
|
|
|
|
| Detalji |
| Projekt: |
Povećanje transdukcije adenovirusnih vektora i otpornost stanica na citostatike |
| Voditelj: |
Andreja Ambriović Ristov |
| Ustanova: |
Institut "Ruđer Bošković", Zagreb |
| Sažetak: |
Vektor temeljen na adenovirusu tip 5 (Ad5) često se upotrebljava u genskoj terapiji tumora za prijenos gena (transdukciju) u ciljnu stanicu. Prvi način kako se može povećati transdukcija je povećanje ekspresije prirodnih Ad5 receptora. Naši rezultati su pokazali da je tijekom razvoja otpornosti stanica na cisplatinu došlo do povećane ekspresije primarnog Ad5 receptora CAR (coxsackie-adenovirus receptor) i integrina avß3, zbog čega je transdukcija otpornih stanica 5 puta bolja od roditeljskih. Osim toga otkrili smo da povećana ekspresija avß3 integrina u roditeljskim stanicama čini stanice otpornima na nekoliko citostatika, a da cisplatina utječe na povećanu ekpresiju CAR već 24 sata nakon izlaganja. Drugi način povećanja Ad5 transdukcije je gensko preusmjeravanje na novi receptor na ciljnoj stanici. Konstruirali smo Ad5NGR4C ugradnjom motiva NGR4C (asparagin-glicin-arginin okruženi s 4 cisteina) u Ad5 vlakno i time preusmjerili transdukciju na aminopeptidazu N (APN). Drugi zanimljiv motiv za preusmjeravanje je av integrin-specifični RGD4C (arginin-glicin-asparaginska kiselina okruženi s 4 cisteina). Nedavno je pokazana ključna uloga integrina avß5 u transdukciji s Ad5RGD4C. U Ad5, pa tako i u Ad5RGD4C, postoji i prirodni RGD motiv u pentonu koji koristi oba integrina avß3 i avß5.
Ciljevi predloženog projekta su: 1. Istražiti signalni put od avß3 integrina odgovoran za otpornost stanica na citostatike; 2. Pokazati je li povećana ekspresija CAR može utjecati na otpornost na citostatike; 3. Istražiti učinak povećanja ekspresije CAR cisplatinom; 4. Konstruirati Ad5RGD4C i istražiti utjecaj ekspresije avß3 i avß5 integrina na transdukciju; 5. Otkriti veže li se Ad5NGR4C na APN na stanicama plućnog epitela; 6. Istražiti mehanizam transdukcije preusmjerenih Ad5RGD4C i Ad5NGR4C.
Naša istraživanja su važna za terapiju tumora u cjelini jer istražuju djelovanje citostatika, razvoj otpornosti na citostatike, te međudjelovanje ovih dvaju faktora s genskom terapijom tumora posredovanom Ad5. Naši rezultati mogu uputiti na moguće sinergističko djelovanje citostatika i genske terapije tumora. Važnost preusmjeravanja na APN proizlazi iz dostupnosti ovog receptora; na epitelnim stanicama dišnih puteva APN se nalazi iznad zaštitnog glikokaliksa. Razumijevanje mehanizama transdukcije preusmjerenih Ad5 je potrebno u procjeni povoljnih genskih promjena vektora za što učinkovitiji prijenos gena u ciljne stanice. |
|
|
|
|
|
|
|
