|
|
 |
|
|
|
|
|
|
| Detalji |
| Projekt: |
Funkcija fosfoinozitol 3-kinaze C2 beta u staničnim jezgrama |
| Voditelj: |
Hrvoje Banfić |
| Ustanova: |
Medicinski fakultet, Zagreb |
| Sažetak: |
Našim prethodnim istraživanjima dokazana je nazočnost i aktivacija fosfoinozitol 3-kinaze C2 beta (PI3K-C2 beta) u staničnim jegrama. Cilj istraživanja je određivanje mehanizama aktivacije i funkcije PI3K-C2 beta u staničnim jezgrama, a glavna hipoteza je pronicanje uloge enzima u kontroli staničnog rasta. U tu svrhu istraživati će se nazočnost enzima u unutarjezgrinom odsječcima, gdje se unutar PI3K-C2 bete nalazi aminokiselinski slijed odgovoran za lokalizaciju enzima u staničnoj jezgri, te koji su mehanizmi olakšanog transporta enzima u staničnu jezgru. S obzirom da je iz naših prethodnih istraživanja poznato da se PI3K-C2 beta aktivira cijepanjem putem proteaze kalpaina koja uklanja C2 domenu enzima, te na taj način izaziva aktivaciju enzima, odrediti će se točno mjesto na kojem kalpain cijepa enzim, te da li se to zbiva prije ili tek nakon što enzim uđe u staničnu jezgu. S obzirom da se potencijalni aminokiselinski slijed odgovoran za lokalizaciju PI3K-C2 bete u staničnoj jezgri nalazi unutar C2 domene enzima, a proteaza kalpain cijepa enzim uzvodno od tog mjesta, hipoteza je da će do cijepanja enzima kalpainom doći kad se enzim već nalazi u staničnoj jezgri što će dovesti do njegove istovremene aktivacije i "zarobljavanja" u staničnoj jezgri. Nadalje, ispitat će se učinci pojačane ekspresije i učinci kočenja ekspresije PI3K-C2 bete pomoću siRNA na rast stanica i stanični ciklus. S obzirom da je poznato da se enzim aktivira u jezgrama hepatocita nakon djelomične hepatektomije, te da postoji miš u kojem je izbačen gen za enzim napravit će se pokusi u kojima će se ispitati uloga enzima u kompenzacijskom rastu jetre. Kako je poznato da u staničnim jezgrama aktivirani enzim stvara samo fosfatidil-inozitol 3-fosfat (PtdIns(3)P) učinit će se tranzijentna transfekcija stanica s EGFP-2xFYVE kako bi se s pomoću konfokalnog mikroskopa odredila unutarjezgrina razdioba PtdIns(3)P. Također će se napraviti afinitetna kolona koja sadrži PtdIns(3)P, te će se propuštanjem bjelančevina koje se ekstrahiraju iz jezgre utvrditi njihova vrsta i potencijalna funkcija u jezgri. Očekivani rezultati važni su za spoznaju sustava inozitol lipidnih drugih glasnika, a poglavito PtdIns(3)P u staničnoj jezgri i moguću ulogu istih u kontroli staničnog rasta. Rezultati će biti provjereni opće poznatim statističkim obradama, a važnost predloženog istraživanja ogleda se u spoznaji temeljne fiziološke funkcije inozitol lipidnih drugih glasnika u staničnoj jezgri. |
|
|
|
|
|
|
|
