|
|
 |
|
|
|
|
|
|
| Detalji |
| Projekt: |
Regulacija transkripcije kod eukariota |
| Voditelj: |
Marija-Mary Sopta |
| Ustanova: |
Institut "Ruđer Bošković", Zagreb |
| Sažetak: |
Najznačajniji mehanizam u kontroli ekspresije gena kod eukariota je regulacija transkripcije gena koji se prepisuju RNA polimerazom II. Kod eukariota u tom procesu sudjeluje veliki broj proteinskih faktora od kojih su neki potrebni za transkripciju gotovo svih gena dok neki sudjeluju u finoj regulaciji transkripcije sa pojedinih promotora. Za većinu ovih faktora pokazano je da su konzervirani od kvasca do čovjeka tako da istraživanja u modelnom organizmu kvasca S. cerevisiae predstavljaju dobar način za otkrivanje principa transkripcije kod viših eukariota. Jedan od prvih modelnih sustava regulacije transkripcije kvasca je indukcija ekspresije grupe gena pomoću aktivatora Gal4. Protein Gal4 je prototip kiselih aktivatora koji u prisustvu galaktoze inducira prepisivanje gena čiji su proteinski produkti potrebni za prijenos galaktoze u stanicu i njen metabolizam fermentacijom. Glavni faktori transkripcije su grupa proteina za koju se smatra da je potrebna za inicijaciju transkripcije sa svih poznatih promotora. U ovu grupu spadaju TFIIA, TFIIB, TFIID, TFIIE, TFIIF i TFIIH. Humani TFIIF je heterodimer proteina RAP30 i RAP74 dok se homologni kvaščev faktor sastoji od 3 proteinske podjedinice Tfg1, Tfg2 i Tfg3. Potonji je sastavni dio i niza drugih faktora koji sudjeluju u regulaciji transkripcije. Tfg1 i Tfg2 su esencijalni za preživljenje stanice što je u skladu s njihovom ključnom ulogom u inicijaciji transkripcije. Cilj predloženog projekta je daljnja karakterizacija funkcije aktivatora Gal4 i glavnog faktora inicijacije TFIIFa. Predlažemo testiranje hipoteze o postojanju fosforilacije serina u DNK vezujućoj domeni aktivatora Gal4 kao mehanizma regulacije funkcije te domene in vivo i in vitro. Konstrukcijom mutanata koje umjesto serina u DNK vezujućoj domeni imaju alanine testirat ćemo utjecaj tih mutacija na transkripciju in vivo i svojstva vezivanja in vitro. Također predlažemo karakterizaciju više aspekata funkcije TFIIFa. Testirat ćemo hipotezu o in vivo regulaciji unutarstanične lokalizacije podjedinica faktora TFIIF. Konstruirat ćemo više različitih mutanti kvaščevog TFIIFa i ispitati njihovu funkciju in vivo te odrediti razinu ekspresije pojedinih podjedinica na nivou organizma koristeći C.elegans kao modelni eukariot. Ova istraživanja značajna su u daljnjem razotkrivanju principa kontrole transkripcije kod eukariota što će pripomoći budućem razvoju terapijskih protokola čiji je cilj kontrola regulacije transkripcije u stanjima bolesti. |
|
|
|
|
|
|
|
