|
|
 |
|
|
|
|
|
|
| Detalji |
| Projekt: |
Gensko liječenje tumora djelovanjem na molekule imunološkog sustava |
| Voditelj: |
Jasminka Pavelić |
| Ustanova: |
Institut "Ruđer Bošković", Zagreb |
| Sažetak: |
Promjene gena opisane dosada kao čimbenik zloćudne preobrazbe odnose se uglavnom na onkogene i supresorske gene (regulatori staničnog ciklusa). Zato osnovu genskog liječenja (GL) oboljelih od tumora čine dokidanje/poticanje aktivnosti gena i izravno uništenje stanica tumora. Uloga imunološkog sustava (IS) u tom procesu poznata je, zasada, samo u svjetlu slabe antigeničnosti tumora. Logično je, međutim, pretpostaviti da razlog neučinkovitosti IS može biti skriven i unutar samog domaćina, na razini gena za molekule IS. Stoga strategija GL oboljelih od tumora ispravljanjem takve pogreške predstavlja logičan pristup. U tom je smislu uloga gena koji kodiraju za Toll-like receptore 3 i 9 (TLR3 i 9) potpuno neistražena. Razumno je također pretpostaviti i činjenicu da na nejednaki obrazac razvitka imunosupresije u osoba koje boluju od iste vrste tumora djeluje, možda, i polimorfizam spomenutih gena. U predloženim istraživanjima ispitivat ćemo postojanje polimorfizama/mutacija gena TLR3 i 9 u osoba koje boluju od karcinoma dojkle, pluća i prostate. Provodit ćemo i funkcionalne analize gena uključenih u unutarstanični signalni put na: a) stanicama bubrega embrija čovjeka (HEK293, ne posjeduju TLR), b) na stanicama gdje se TLR prirodno nalaze (monociti-dendritičke stanice od tumora oboljelih osoba), na razini fosforilacije inhibitornog kompleksa, aktivacije transkripcijskog faktora NF-(kapa)B te ispoljenosti membranskih antigena CD80, CD86 i MHC (dendritičke stanice), a uz pomoć plazmidnih vektora pEF-BOS s mutagenezom in vitro konstruiranim varijantama gena za TLR3 i 9 i plazmidnim vektorom pELAM s ugrađenim test genom (gen za luciferazu). Dominaciju/recesivnost nađenih mutacija određivat ćemo kotransfekcijom stanica s divljim tipom i različitim oblicima mutiranih oblika gena. Prisutnost i aktivnost gena TLR na stanicama tumora određivat ćemo na razini mRNA (RT-PCR) i proteina, a uz to vezan spektar promjena i drugih gena uključenih u signalne puteve istražit ćemo metodama DNA čip tehnologije odnosno proteomskom analizom. Ovisno o podacima, pokuse GL provodit ćemo dokidanjem/poticanjem aktivnosti (siRNA, antagonisti, stimulatori molekula sekundarnih glasnika, ligandi-agonisti) gena molekula IS. Svrha je pokazati može li se korekcijom mutacija i/ili djelovanjem na signalne puteve IS (i nekih drugih) dokinuti rast tumora.
Originalan doprinos realizacije ovog projekta je gensko liječenje tumora korigiranjem aktivnosti gena/molekula IS domaćina. |
|
|
|
|
|
|
|
