|
|
 |
|
|
|
|
|
|
| Detalji |
| Projekt: |
UČINAK ONEČIŠĆENJA NA GENETIČKU STRUKTURU ORGANIZAMA U VODENOM OKOLIŠU |
| Voditelj: |
Goran Igor Vinko Klobučar |
| Ustanova: |
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb |
| Sažetak: |
Antropogeni utjecaj na okoliš i organizme koji ga nastanjuju uključuje i onečišćenjem uzrokovane promjene u molekuli DNA. Zbog značaja DNA u homeostazi organizama te u prijenosu genetičke informacije na sljedeće generacije njezino oštećenje od posebne je važnosti u procjeni okolišnog rizika. Oštećenje DNA organizama koji nastanjuju onečišćeni okoliš moguće je detektirati mnogim molekularno-citogenetičkim metodama (biomarkeri genotoksičnosti) od kojih se komet-test (KT) i mikronukleus-test (MNT) izdvajaju kao jedne od najpogodnijih zbog svoje jednostavnosti, osjetljivosti i brzine. Međutim, razumijevanje biološkog značaja uočenih oštećenja, odnosno njihove povezanosti s promjenama na razini organizma i populacije, još uvijek je relativno neistraženo. Stoga nam je namjera primjenom molekularno bioloških metoda dobiti detaljniji uvid u promjene strukture DNA i biološke mehanizme koji reguliraju odgovor organizma izloženog genotoksičnom djelovanju. Posljedice oštećenja DNA, izazvanog modelnim genotoksikantima i određenog pomoću KT i MNT, na promjene u genetičkoj strukturi staničnih kultura riba (primarne i PLHC-1) te test-organizama (ribe, školjkaši i biljke) procijenit će se metodom nasumično umnožene polimorfne DNA (RAPD) i analizom mikrosatelitne DNA (ISSR) te metodom CRED-RA kojom se analizira razina metiliranosti DNA. Promjene će se pratiti i kroz nekoliko generacija (ribe zebrice, Danio rerio). Osim navedenih, neizravnih metoda, za točan uvid u promjenu strukture DNA utvrđivat će se redoslijed nukleotida u kodirajućim i nekodirajućim područjima genoma. Istim metodama analizirat će se promjene na razini genoma u kavezno izlaganim jedinkama i prirodnim populacijama izloženim okolišnom onečišćenju (Unio pictorum, Mytilus galloprovincialis, Cyprinus carpio). U svrhu analiziranja intenziteta genotoksičnog djelovanja detektirat će se i stanice u apoptozi pomoću NDD-testa i TUNEL metode. Saznanja o promjeni strukture genoma povezat će se s promjenama koje će se u laboratorijskim uvjetima pratiti na razini jedinke (fertilnost, brojnost i vijabilnost potomstva, mjerenje promjenjive asimetrije kao mjere razvojne nestabilnosti i dr). Uočene promjene pokušat će se opisati matematičkim modelima. Navedena istraživanja, zajedno s usavršavanjem već korištenog alkalnog KT u uvjetima neutralnog i pH 12,1 u cilju dobivanja preciznijih informacija o vrsti oštećenja DNA, unaprijedit će dijagnostiku i razumijevanje genotoksičnog djelovanja onečišćenja na organizme u okolišu. |
|
|
|
|
|
|
|
